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CMV感染是異基因HSCT術(shù)后嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，與急性和慢性GVHD的風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)。目前CMV感染的治療措施包括免疫抑制劑減量、使用抗病毒藥物和CMV特異性T細(xì)胞過繼治療等。既往系列病例報(bào)道證實(shí)大劑量 IVIG或高滴度CMV-IVIG聯(lián)合更昔洛韋治療，可提高CMV肺炎的免疫缺陷患者生存率。目前IVIG對(duì)CMV感染的治療存在爭議，2017歐洲白血病感染會(huì)議僅推薦IVIG用于治療 CMV肺炎。

遵循目前國際共識(shí)，針對(duì)CMV肺炎，推薦抗病毒藥聯(lián)合高滴度的CMV-IVIG0.15 g/kg，隔天1次，治療2周，共7次，然后每周1次，共4周；若無CMV-IVIG可用，推薦標(biāo)準(zhǔn)化的IVIG0.5g/kg，療程同CMV-IVIG。

一、靜注巨細(xì)胞病毒人免疫球蛋白體外藥效學(xué)研究

1.目的

實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)靜注巨細(xì)胞病毒人免疫球蛋白（pH4）（human cytomegalovirus immunoglobulin for intravenous injection，CMV-IVIG）抑制巨細(xì)胞病毒（cytomegalovirus，CMV）感染的有效性。

2.方法

分別通過免疫熒光染色和細(xì)胞病變實(shí)驗(yàn)測定CMV-IVIG抑制CMV的即早基因1表達(dá)和致細(xì)胞病變能力，確認(rèn)CMV-IVIG有效性。

3.結(jié)果

即早基因1表達(dá)量與病變細(xì)胞數(shù)量隨著制品稀釋倍數(shù)的增加而增加；27倍稀釋的CMV-IVIG可抑制90.77%~95.85%的CMV感染力；103倍稀釋的CMV-IVIG可抑制＞90%的細(xì)胞病變。

4.結(jié)論

CMV-IVIG中的中和抗體能特異性中和CMV，阻止CMV感染細(xì)胞，且具有良好的量效關(guān)系。

5.正文       

巨細(xì)胞病毒（cytomegalovirus，CMV）是皰疹病毒科β屬的DNA病毒，在發(fā)展中國家成年人中感染率可達(dá)100%。雖然通常呈隱性感染，但當(dāng)機(jī)體免疫功能低下時(shí)，病毒可被激活而發(fā)生顯性感染。孕婦初次或復(fù)發(fā)CMV感染引起新生兒宮內(nèi)感染或圍產(chǎn)期感染侵襲胎兒，是導(dǎo)致先天畸形的重要原因之一。目前尚無治療CMV感染疾病的特效藥物，由于抗CMV抗體可以保護(hù)特定人群抵抗CMV感染疾病，因此，目前使用抗病毒藥物或聯(lián)合抗病毒藥物和靜注巨細(xì)胞病毒人免疫球蛋白預(yù)防和治療CMV感染疾病。

CMV基因組復(fù)制緩慢，基因表達(dá)具有嚴(yán)格的時(shí)相性。即早基因（immediate early gene，IE）1在感染后3 h開始在細(xì)胞核中表達(dá)，6 h后即可被檢出；而CMV晚期基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯發(fā)生在感染后的36~48 h[11]。因此，采用免疫組織化學(xué)法可使感染CMV的細(xì)胞核特異性著色。

二、具體研究過程

1.方法：

IE1表達(dá)量抑制實(shí)驗(yàn)。CMV-IVIG與中和用CMV等量混和，每個(gè)濃度樣品2個(gè)復(fù)孔，37 °C、5%CO2中和1 h。然后加入MRC-5細(xì)胞于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)16~18 h。同時(shí)設(shè)陽性對(duì)照（維持液代替CMV-IVIG）和陰性對(duì)照（維持液代替CMV-IVIG和病毒）。經(jīng)過細(xì)胞固定、封閉及加抗CMV IE1單克隆抗體、生物素化抗鼠IgG、親和素化鏈霉抗生物素蛋白，最后顯色。顯色后在體視顯微鏡下采集各孔圖像，用克隆計(jì)數(shù)軟件計(jì)數(shù)每孔的特異性著色細(xì)胞核。

細(xì)胞病變實(shí)驗(yàn)。CMV-IVIG與同體積的CMV于37 ℃、5%CO2中和1 h后，加入 MRC-5細(xì)胞于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)48 h，設(shè)陽性對(duì)照（維持液代替CMV-IVIG）和陰性對(duì)照（維持液代替CMV-IVIG和病毒），在倒置生物顯微鏡下觀察MRC-5細(xì)胞的致細(xì)胞病變程度，記錄觀察結(jié)果。

2.結(jié)果：

IE1表達(dá)量抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

同體積的不同稀釋倍數(shù)CMV-IVIG在加入相同量的CMV后，殘留病毒數(shù)不同，殘留病毒感染細(xì)胞后在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)的IE1數(shù)量也不同，經(jīng)染色后計(jì)數(shù)結(jié)果也不同。稀釋倍數(shù)越高，特異性著色的細(xì)胞核越多，即IE1表達(dá)越多。

隨著CMV-IVIG稀釋倍數(shù)的增加，降低病毒感染力的程度減小，病毒感染力增強(qiáng)（IE1表達(dá)越多）。在128倍稀釋度時(shí)，能降低約93%的病毒感染力，而在4096倍稀釋度時(shí)50%樣品降低病毒感染力的能力已降到0。

細(xì)胞病變實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

同體積的不同稀釋倍數(shù)的CMV-IVIG能中和的同體積病毒液中的病毒數(shù)不同，殘存的病毒導(dǎo)致的MRC-5細(xì)胞病變的范圍程度也不同。隨著CMV-IVIG稀釋程度的增加，相同體積樣品內(nèi)含有的CMV-NA量也減少，而致細(xì)胞病變的程度增加，說明CMV-NA能特異性有效阻止CMV感染細(xì)胞，避免細(xì)胞發(fā)生病變。

3.討論：

IE1表達(dá)量抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，隨著CMV-IVIG稀釋倍數(shù)的增加，相同體積樣品內(nèi)含有的CMV-NA量也減少，IE1表達(dá)越多，即病毒感染力越強(qiáng)，CMV-IVIG 能降低病毒感染力的程度越小，在128倍稀釋時(shí)，殺滅了絕大部分病毒（平均93%），而在4096倍稀釋時(shí)50%樣品已無降低病毒感染力能力（IE1表達(dá)與陽性對(duì)照一致）。細(xì)胞病變實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著制品稀釋程度的增加，致細(xì)胞病變的程度也在增加，說明CMV-NA能特異性有效阻止CMV感染細(xì)胞，避免細(xì)胞發(fā)生病變。

體外藥效學(xué)研究結(jié)果顯示：CMV-IVIG所含有的特異性中和抗體能有效中和病毒，阻止CMV感染細(xì)胞；中和病毒的能力與CMV-IVIG中的中和抗體含量呈正相關(guān)，具有良好的量效關(guān)系。基于上述結(jié)果，CMV-IVIG應(yīng)具有相應(yīng)的臨床藥效。